هر نمونه را با آسیاب کردن به صورت پودر بسیار ریز درآورید.
خشک کردن
نمونه ها را در دمای ۶۰ درجه سانتیگراد خشک شد.
استخراج
(این مقادیر برای لوله های ۱۵ میلی لیتری است)
پایان نامه - مقاله - پروژه
برای هر نمونه، ۲۰ میلی گرم پودر خشک شده را توزین و در لوله های فالکون ۱۵ میلی لیتری ریخته شد.
۴ میلی لیتر آب دیونیزه اضافه شد؛ بلافاصله پوشانیده شد و به خوبی سروته گردید.
قفسه نمونه را در حمام آب به مدت ۴۵ دقیقه در دمای ۷۰ درجه سانتیگراد قرار داده شد.
نمونه ها را بطور کامل به مدت ۱۵ دقیقه سر و ته گردید.
پس از انکوباسیون، نمونه ها را روی یخ قرار داده شد.
به مدت ۱۰ دقیقه در ۳۰۰۰ دور در دقیقه سانتریفیوژ گردید.
از محلول رویی شناور بسته به نوع ماده برای رقیق سازی استفاده گردید:
گندم: ۱به ۵۰ (µl 100 محلول رویی شناور در ۹/۴ میلی لیتر آب دیونیزه)
ذرت: ۱به ۲۰ (µl 250 محلول رویی شناور در ۷۵/۴ میلی لیتر آب دیونیزه)
واکنش رنگ سنج
۵/۲ میلی لیتر از رقیق شده را برداشته و با احتیاط به لوله فالکون جدیدی در آب سرد منتقل گردید.
با بهره گرفتن از بورت، به آهستگی ۵ میلی لیتر محلول آنترون به هر لوله اضافه شد؛ به تکان دادن لوله در آب دارای یخ ادامه داده شد.
هر لوله را به خوبه سروته گردید.
لوله ها را ببندید و در حمام آب داغ به مدت ۵/۷ دقیقه قرار داده شد.
لوله ها را از حمام آب خارج و اجازه داده شد تا با دمای اتاق هم دما شوند.
جذب را بوسیله اسپکترفتومتر در طول موج ۶۳۰ نانومتر قرائت شد.
جدول ‏۳-۳- مقیاس پایین واکنش رنگ سنجی و توصیه های ویژه برای استفاده از میکروپلیت

 

معرف مرحله لوله ۱۵ میلی لیتری میکروپلیت
هیدرولیسات معرف رنگ سنجی ۵/۲ میلی لیتر µL 50
معرف رنگ سنجی معرف رنگ سنجی ۵ میلی لیتر µL 100

الف- هر نمونه با ۳ تکرار در میکروپلیت آنالیز شد.
ب- ۹۶ پلیت مطلوب روی یخ نگهداری شدند.
ج- محلول آنترون را با بهره گرفتن از پیپت چندشاخه ای دیجیتال اضافه گردید. با احتیاط انجام شد تا مطمئن شدیم که همه µL 100 به خوبی منتقل شده است.
د- پلیت را با نوار آلومینیومی بپوشانید و خیلی با احتیاط سروته کنید تا محلول همگنی در هر کدام به خوبی مشاهده شود.
م- پلیتها را در دمای ۱۰۰ درجه سانتیگراد به مدت ۲۰ دقیقه با نمونه های ذرت و به مدت ۱۰ دقیقه با نمونه های گندم انکوبه گردید.
ص- پلیتها را در یخچال به مدت ۱۰ دقیقه پیش از قرائت با دستگاه قرائت کننده میکروپلیت خنک گردید.

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...